1、清潔樣品表面
(1)對于每種細(xì)胞計數(shù)方法,樣品表面必須清潔。
(2)任何污染都可能導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。
(3)對于人工細(xì)胞計數(shù),這包括移除并清潔玻璃蓋,然后用70%乙醇和水清潔計數(shù)室。
(4)當(dāng)使用一次性塑料載玻片時,每個樣品都需要一個新的載玻片(如果載玻片有兩個單獨的腔室,則需要一對樣品)。
2、加載樣品前需要渦流振蕩
(1)渦流振蕩處理是在加載樣品之前確保分析樣品的代表性的重要步驟。
(2)不同大小和類型的細(xì)胞將以不同的速率沉降和聚集。在加載樣品之前立即旋轉(zhuǎn)溶液將增加均分的概率,并準(zhǔn)確反映細(xì)胞培養(yǎng)的特征。
3、降低細(xì)胞聚集率
(1)細(xì)胞計數(shù)需要分析整個細(xì)胞懸浮液中的少量樣品,因此必須小心確保樣品代表原始的整個單細(xì)胞懸浮液。聯(lián)川生物采用臺盼藍計數(shù)法、熒光計數(shù)計數(shù)星法、最原始的血細(xì)胞計數(shù)板法等方法監(jiān)測和計算細(xì)胞活性。
(2)手動計數(shù)時,與單個細(xì)胞相比,細(xì)胞聚集率/聚集率的評分更主觀,從而增加了變異性。細(xì)胞裂解后從細(xì)胞中釋放的DNA(會導(dǎo)致粘稠的團塊)和細(xì)胞碎片是導(dǎo)致團塊的常見原因。
4、細(xì)胞計數(shù)參數(shù)調(diào)整
大多數(shù)自動細(xì)胞計數(shù)器可以調(diào)整各種設(shè)置參數(shù),以最佳匹配正在研究的細(xì)胞。
例如,可以設(shè)置和保存細(xì)胞大小范圍,以從分析中排除片段或其他細(xì)胞群。Countstar和其他計數(shù)器可以使用PBMC、Vero和其他單元格作為標(biāo)準(zhǔn)參考。